斑马鱼助力化妆品温和无刺激功效评价

在崇尚自然与肌肤和谐共融的当下，具有温和无刺激功效的化妆品已成为行业不可逆转的潮流。随着科技的不断进步与消费者偏好的深刻变化，我们预见未来化妆品市场将更加聚焦于温和配方与高效护肤的完美结合。天然成分的深度挖掘与科学配比的精准应用，将为各类肤质提供定制化、高效且安全的护肤体验。

尤为值得关注的是，斑马鱼作为生物检测模型，正逐步成为评估化妆品温和无刺激功效的重要工具，其快速、高效且准确的特点，将为化妆品行业带来革命性的变革，引领我们向更加科学、精准的护肤时代迈进。

01、斑马鱼检测

检测原理：斑马鱼胚胎在发育初期全身透明，胚胎发育至受精后24h时会产生自旋运动。当有鱼胚受到化学刺激后，其产生的自旋运动次数会增多；若加入受试样品后，其自旋运动次数与空白对照组对比无显著差异，则证明受试物具有温和无刺激功效。通过比较斑马鱼胚胎的自旋运动次数变化对化妆品原料及产品进行温和无刺激功效评价。

检测文件：

T/HPCIA 006—2022 《化妆品——温和刺激性测定的斑马鱼胚法》这一重要标准的发布，标志着化妆品功效检测领域取得了又一里程碑式的进展。该标准通过引入斑马鱼胚法这一前沿科技手段，为化妆品温和刺激性评估开辟了一条全新的路径，不仅极大地提升了检测的精准度与科学性，还进一步强化了化妆品安全性和温和性的评估体系。

此项标准的出台，不仅响应了消费者对化妆品更高安全标准的迫切需求，也为化妆品企业提供了更为可靠、高效的检测依据，有助于企业优化产品配方，减少刺激性成分的使用，从而推动整个行业向更加绿色、健康、可持续的方向发展。此外，斑马鱼胚法的应用，以其快速、直观、伦理争议较小的特点，正逐步成为替代传统动物实验的重要选项，体现了化妆品行业在科技进步与伦理关怀上的双重进步。不仅是化妆品检测技术的一次革新，更是化妆品行业迈向高质量发展阶段的重要一步，为构建更加安全、可靠、人性化的化妆品市场奠定了坚实的基础。

02、具体内容介绍

2.1定义

受精后小时数（hour post-fertilization；hpf）：斑马鱼受精卵受精后的小时数。

摆动次数：斑马鱼卵黄囊位置的移动次数，即为摆动次数。

刺激性：皮肤刺激性主要表现为皮肤的疼痛或瘙痒。在24hpf时期，斑马鱼胚胎运动神经已发育，但尚未有自主运动产生，此时外界的疼痛或痒刺激会使胚胎出现行为学变化。

2.2受试物

阳性对照：1mMol/L（0.29mg/mL）十二烷基硫酸钠（SDS），参考《化妆品——温和刺激性测定的斑马鱼胚法》T/HPCIA 006—2022配制。

2.3适用范围

适用于化妆品（膏霜、乳液、凝胶、精华等）及化妆品原料的温和无刺激功效评价。

2.4 斑马鱼品系

选用野生AB品系24hpf斑马鱼胚胎。

2.5养殖要求

① 养殖水温宜控制在26～28.5℃，室内温度建议控制在20～25℃。

② 养殖密度宜控制在每升水1～2条鱼，以及每日固定的12～16h光照，且需保持良好的过滤系统。

③ 每天至少喂食2次，包括至少1次丰年虾（Artemia salina）幼虫，喂食间隔在3小时以上，避免过量喂食影响水质和清洁度。

2.6试验流程

① 挑选发育正常的24hpf斑马鱼胚胎作为试验对象。

② 进行预实验确定受试物的最大耐受浓度（即未出现胚胎畸形或死亡现象）。

③ 正式试验用显微镜拍摄斑马鱼胚胎摆动影像（不少于30s）。

④ 应用图像分析软件分析影像计算摆动次数。

图为斑马鱼胚胎摆动

2.7结果计算

① 分别记录及计算各组别中每个平行组的胚胎（24hpf）在30s内的累计刺激摆动次数。    

② 使用 GraphPad Prism 8.0 统计分析软件（或类似功能工具）对累计刺激摆动次数进行统计分析，数值用均值±标准误（Mean±SEM）表示，使用GraphPadPrism8.0不同组间利用 One-way ANOVA 进行显著性分析，判定P<0.05 为有显著性差异。

当斑马鱼摆动幅度超过阈值时统计软件便会识别并记录

2.8试验有效性条件

① 试验开始15分钟内各组别需保证斑马鱼胚胎死亡率≤0%。

② 阳性对照组摆动次数须比空白对照组摆动次数显著提高（p<0.05）。

③ 溶剂对照组（若存在溶剂对照组）摆动次数须与空白对照组摆动次数无显著差异（p≥0.05）。

2.9试验仪器

① 体视显微镜，配带显微拍照系统。

② 分析天平，精度大于等于0.1mg。

③ 生化培养箱，温度控制范围5℃~50℃，温度精度±0.1℃

④ 斑马鱼养殖设备，需配有温控装置，水循环和过滤装置，养殖容器用玻璃或常见食品级PC材质制成

2.10结果评价

在试验满足有效性的基础上，受试物中斑马鱼胚胎摆动次数与空白对照组相比无统计学上的显著性差异，即P≥0.05，可作为受试品具有温和无刺激功效的证据支撑之一。

03、样例介绍

 3.1各测试组别样例展示

空白组

阳性对照组

样品组

某一受试物温和无刺激检测结果

3.2结果分析

如上图所示，由上图可知受试物的刺激性越小，斑马鱼胚胎摆动的频率越低，当摆动次数与空白对照组胚胎摆动次数相比无统计学差异（p≥0.05），测试结果可作为受试物具有温和无刺激功效的支持证据。

04、关于斑马鱼检测

① 非动物：鱼胚胎检测方法属于非动物测试，符合全球关于动物替代测试发展趋势。

② 高通量：具有高通量优势，可快速低成本完成更多检测项目，如原料功效研究，原料筛查，配方甄选等。

③ 可视化：检测方法具有可视化优势，可让消费者直观感知产品的品质。

④ 高效率：与传统检测机构相比，斑马鱼检测更全面，能快速得到检测结果。

⑤ 低成本：相比人体临床或动物实验，斑马鱼检测成本相对较低。

863中心-斑马鱼实验室Zebrafish Laboratory

863中心具有丰富的化妆品及化妆品原料检测经验，已取得化妆品毒理学试验相关检测资质，形成了集化妆品微生物检验、理化检验、毒理学试验和人体安全性检验及功效评价等多方位检测服务链，全面覆盖化妆品原料及产品的注册和备案检验的各个方面，具有完善的服务内容和服务网络，能为客户提供专业的咨询和测试服务。