化妆品致突变性评价—体外哺乳动物细胞染色体畸变试验

在化妆品消费日益增长的今天，产品安全性已成为公众关注的核心议题。作为评估化妆品原料及终产品的潜在遗传毒性的方法，体外哺乳动物细胞染色体畸变试验通过模拟人体代谢环境，精准捕捉化学物质对染色体结构的损伤。随着《化妆品监督管理条例》、《化妆品注册备案管理办法》的落地实施，监管部门对化妆品致突变性评价的技术要求持续升级。本文将深入解析该试验，为企业开展合规性检测提供科学指引，共同守护消费者用妆安全。

一、检测原理

将哺乳动物细胞（如中国仓鼠肺细胞CHL）暴露于受试物后，添加S9混合物模拟体内代谢环境，使受试物或其活性代谢产物作用于细胞分裂周期。当细胞进入有丝分裂中期时，通过秋水仙素阻滞分裂进程，收集细胞并制备染色体标本。此时能通过显微镜观察细胞有丝分裂中期的染色体形态，观测染色体断裂、裂隙、微小体、有着丝点环、无着丝点环等结构畸变。最后统计染色体畸变细胞率，评估受试物对染色体的损伤潜能，进而推断其潜在的致突变性和遗传毒性。

二、测试文件

为了满足我国化妆品监管实际的需要，结合行业发展和科学认识的提高，国家食品药品监督管理总局组织完成了对的《化妆品卫生规范》（2007年版）的修订工作，编制了《化妆品安全技术规范》（2015年版）。

如今，为进一步规范和指导化妆品及新原料的安全评价工作，根据《化妆品监督管理条例》、《化妆品注册备案管理办法》等相关法规和配套文件要求，中检院起草了《体外哺乳动物细胞染色体畸变试验技术指导原则（征求意见稿）》等6项技术指导原则及其起草说明。

三、具体内容介绍

3.1适用范围

本试验适用于检测化妆品原料及其终产品的致突变性。

3.2阳性对照

-S9组阳性对照：丝裂霉素C。

+S9组阳性对照：环磷酰胺。

3.3实验流程

1. 确定受试物在不含血清的RPMI-1640 培养基中的溶解情况。

2. 通过MTT法检测受试物对细胞的毒性，并确定合适的试验剂量。

3. 将受试物与细胞共培养一段时间后，加入细胞分裂中期阻断剂：秋水仙素。

4. 低渗、固定、制片、干燥、染色、清洗、晾干，最后于显微镜观察染色体畸变情况。

3.4结果计算

染色体畸变细胞率%=畸变细胞数/观察细胞总数*100

染色体畸变细胞率的组间差异分析采用用X2检验，以评价受试物的致突变性。

3.5试验仪器

1. 正置相差显微镜，配带显微摄像系统。

2. 生物安全柜

3. 二氧化碳培养箱

4. 酶标仪

5. 自动细胞计数仪

3.6结果评价

在下列两种情况下可判定受试物在本试验系统中具有致突变性，若不符合则为阴性结果。

（1）受试物引起染色体结构畸变数具有统计学意义，并有剂量相关性。

（2）受试物在任何一个剂量条件下，引起具有统计学意义的增加，并有可重复性。

四、样例分析

4.1正常与畸变染色体示例

畸变染色体

正常染色体

4.2染色体畸变细胞率

某一受试物致突变性检测结果

4.3结果分析

如上图所示，在加和不加S9混合液的情况下，受试物组的染色体细胞畸变率与阴性对照组相比，p值均大于0.05，无显著性差异。该受试物体外哺乳动物细胞染色体畸变试验结果为阴性。

五、总结
作为化妆品致突变性评价体系的核心环节，体外哺乳动物细胞染色体畸变试验通过S9代谢活化系统模拟人体环境，借助显微观测技术精准识别染色体断裂、裂隙、微小体、有着丝点环等结构异常，为评估化妆品原料及终产品的遗传毒性风险提供关键科学依据。