化妆品舒缓功效测试—体外TNF-α炎症因子含量测定

在化妆品市场日益追求安全与功效并重的今天，产品的舒缓功效宣称已成为行业与消费者关注的热点。作为评估化妆品及其原料抗炎舒缓作用的关键指标之一，肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是介导皮肤炎症反应的核心因子。随着《化妆品监督管理条例》及其配套法规的深入实施，监管部门对化妆品功效宣称的证据支持提出了更高要求。本文旨在系统解析T/SHRH034-2021标准《化妆品舒缓功效测试-体外TNF-α炎症因子含量测定脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7测试方法》，为行业开展科学、规范的化妆品舒缓功效评价提供详尽技术参考，助力产品研发与合规宣称，增强消费者信任。

细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)与巨噬细胞表面抗原识别受体相结合，诱导巨噬细胞，分泌TNF-α等多种细胞因子。TNF-α可以激活Caspase蛋白酶、JNK和转录因子NF-κB三条信号通路，实现其细胞毒性，抗病毒，免疫调节和细胞凋亡等生物学功能，是重要的炎症因子之一。

LPS诱导RAW264.7，是研究炎症因子的经典细胞模型，通过比较阴性对照与受试物给药后RAW264.7分泌TNF-α含量的差异，评价受试物抑制TNF-α分泌的作用。TNF-α含量的测定采用酶联免疫方法(ELISA)，具体原理为：TNF-α与包被在酶标板上的TNF-α抗体特异性结合后，与带有底物标记的抗TNF-α抗体结合，底物被酶催化后，生成有色产物，TNF-α含量与有色产物颜色的深浅呈正相关。用酶标仪450nm波长下测定光密度值(OD)，即可计算TNF-α含量。

为适应我国化妆品行业快速发展及功效评价科学化、精细化的需求，结合当前皮肤科学研究和体外检测技术的不断进步，上海日用化学品行业协会组织制定了T/SHRH034-2021《化妆品舒缓功效测试-体外TNF-α炎症因子含量测定脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7测试方法》。该标准通过规范基于炎症因子TNF-α的细胞水平检测手段，为化妆品舒缓功效的体外科学评价提供了统一、可靠的技术依据。

本标准提供一种经由细菌脂多糖诱导巨细胞系RAW264.7分泌炎症因子TNF-α含量的检测方法，可作为化妆品原料舒缓功效称谓的证据支持之一。

每一次试验都应同时使用阳性对照进行试验。推荐阳性对照物，100μg/mL地塞米松。

1. 细胞消化、接种。

2. MTT法摸索受试物给药剂量。

3. LPS诱导及受试物给药。

4. 细胞上清收集。

5. ELISA检测。

TNF-α抑制率%=（1-受试物TNF-α含量平均值/阴性对照TNF-α含量平均值）*100%

1. 倒置相差显微镜。

2. 生物安全柜。

3. 二氧化碳培养箱。

4. 酶标仪。

5. 自动细胞计数仪。

4.1 TNF-α含量

某一受试物舒缓功效检测结果

4.2 结果分析

如上图所示，受试物与阴性对照相比，TNF-α含量下降，且具有显著性差异(p<0.05)，说明受试物在该受试浓度下具有抑制TNF-α含量的作用，可作为舒缓类化妆品原料称谓的证据之一。

T/SHRH034-2021标准通过建立以脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞RAW264.7为模型、以酶联免疫吸附试验（ELISA）为核心检测手段的体外评价体系，为化妆品舒缓功效的判定提供了科学、可靠且可量化的技术依据。

该方法从细胞接种、剂量摸索到诱导检测，形成了一套完整、规范的实验流程，并明确以TNF-α抑制率作为核心功效判读指标。通过该标准化的测试，能够有效评估化妆品原料抑制关键炎症因子的能力，从而为“舒缓”这一功效宣称提供坚实的实验数据支持。